利用FUCCI观察口腔上皮细胞系(ca9 -22)的细胞周期
使用延时成像观察细胞周期的例子
FUCCI(荧光泛素化细胞周期指示剂)是一种实时有效监测细胞周期进展的荧光探针。以下视频是使用KEYENCE的多功能一体荧光显微镜BZ-X800对引入了FUCCI的口腔源性上皮细胞系(Ca 9-22)进行延时成像而拍摄的。成像时间为60小时，每间隔30分钟(共120张图像)。
利用多点图像采集功能，连续采集6孔板每井3个点(共18个点)，每30分钟一次。
提供的:
Yoshikazu劳斯
新泻大学医学院
显微解剖学院基础医学系统(第三解剖学院)
细胞周期观察中的问题
要使用活细胞进行长期延时成像，保持恒定的温度、CO2浓度和湿度是很重要的。一种简单的方法是，只在捕捉图像时将标本从培养箱中取出。然而，这种方法带来了几个问题，包括:难以再现相同的成像位置，污染或干扰标本的可能性，以及用户每次都需要手动移动样本。
- 一个
- Stage-top孵化器
- B
- 温度和二氧化碳控制器
多功能一体荧光显微镜BZ-X800使用了一个紧凑的舞台顶部培养箱，从而使它能够自动捕获指定数量的图像，同时仍然保持恒定的标本环境。此外，当自动改变放大率、滤镜和其他成像条件时，可以在多个位置捕获图像。这不仅可以方便地进行延时成像，而且可以比传统方法更有效地进行实验。
使用全功能荧光显微镜BZ-X800
- 全电动，操作方便。由于不需要暗室，并且可以安装一个紧凑的培养箱，BZ-X800可以用于方便地启动实时细胞成像。
- 由冷却相机和专用镜头组成的高灵敏度光学系统，使获得高分辨率荧光图像的细胞损伤最小成为可能。
- 可以同时对多个样本进行延时成像，便于在相同条件下进行对比验证。
FUCCI是什么?
该技术通过与荧光蛋白mKO2(单体Kusabira-Orange2)结合，可以实时观察细胞周期的进程，并能发出红色荧光，从而实时观察DNA的复制和分裂状态。cdt1 -在细胞分裂后准备复制dna的G1期，cdt1 -经历了最大量的生长;mAG(发出绿色荧光的单体Azami-Green1)与gemini -在S, G2中经历了最大量的生长;以及从DNA繁殖到细胞分裂的M期。
自2008年成立以来，FUCCI在胚胎学、再生医学、癌症肿瘤学、以及类似的领域，并不断得到改进，包括FUCCI (N+C)不仅在细胞核内部，而且在整个细胞中都标记有FUCCI信号;利用荧光蛋白mCherry和mVenus使G1、S、G2和M期更容易分离的FUCCI2;以及FUCCI (CA)，可以通过添加区分细胞周期间期(G1、S和G2周期)的功能来区分所有四个细胞周期。
